時間分辨熒光免疫分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）是上世紀70年代由芬蘭的Soini和Hemmia提出的一種新型的檢測手段，TRFIA 用稀土離子作為示蹤物標記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細胞,與其螯合劑、增強液(有一部分不需要) 在待反應體系(如:抗原抗體免疫反應、生物素親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等) 發(fā)生特異性親和反應后,用時間分辨熒光分析儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強度,根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值,推測反應體系中分析物的濃度,達到定量分析的目的。TRFIA與化學發(fā)光、電化學發(fā)光免疫檢測技術(shù)并稱為三大超靈敏檢測技術(shù)，在食品檢測、醫(yī)學臨床檢測、環(huán)境檢測以及生物學科研檢測等方面廣泛應用。

目前，根據(jù)熒光增強技術(shù)的不同，TRFIA可分為三種類型：(1)DELFIA (Dissociation enhanced lanthanide fluoroimmunoassay)系統(tǒng)，為芬蘭wallac公司（2000年并入美國PerkinElmer公司）于上世紀80年代推出，因其具有非常高靈敏度，目前在國內(nèi)臨床疾病檢測領(lǐng)域已有廣泛應用；(2)DSLFIA（Direct solid Pahse lanthanide fluoroimmunoassay）系統(tǒng)，為加拿大Cyber Fluor公司推出，但因靈敏度不夠理想，目前在國內(nèi)沒有推廣；(3)基于熒光微球的TRFIA (Micro-TRFIA)，Micro-TRFIA是一種全新的時間分辨熒光檢測手段，它結(jié)合了鑭族元素熒光的長壽命和納米微球的信號放大效應，將鑭族元素Eu3+及其配合物包裹于納米微球中，經(jīng)過表面活化后，將抗體標記于標記物表面，形成復合物，將該復合物用于免疫檢測，可極大地提高靈敏度，并獲得較為寬闊的線性范圍，其實際性能不低于甚至高于DELIFA技術(shù)。

    TRFIA的三種類型中前兩者因其需要解離后再增強或者需要導入生物素-親和素信號放大系統(tǒng)，無法與免疫層析技術(shù)相結(jié)合，僅能與酶標板配合使用，需要多次洗板操作，過程繁復，檢測時間長，且需要較為昂貴的熒光讀數(shù)儀讀數(shù)，因此目前一般僅限于實驗室的檢測，無法實現(xiàn)POCT（Point-Of-Care Testing）應用，而Micro-TRFIA技術(shù)采用高分子聚合物將幾千乃至上萬個熒光分子包裹或連接在聚合物納米粒子中，不但能將熒光信號成千上萬倍的放大，滿足超低含量生物組分的測定，而且高分子納米粒子形成的網(wǎng)狀外殼對有機染料能起到很好保護作用，可有效減弱測定環(huán)境中的活性氧、自由基或其他試劑的光漂白作用，顯著提高熒光分子的光穩(wěn)定性。更為重要的是，Micro-TRFIA技術(shù)可以與免疫層析技術(shù)（Lateral Flow Immunochromatography Assay）完美結(jié)合，開發(fā)出熒光定量免疫層析技術(shù)平臺，實現(xiàn)現(xiàn)場快速定量檢測，檢測靈敏度比膠體金免疫層析技術(shù)高2-3個數(shù)量級，因此成為目前國內(nèi)外研究的新熱點。

      微測生物一直致力于基于Micro-TRFIA技術(shù)的時間分辨熒光方法學的研發(fā)，開發(fā)出的Microdetection ^TM系列 時間分辨熒光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)，每個微球中最多可包裹約18萬個熒光分子，大大提高了熒光微球的熒光強度，有效提高了分析靈敏度；同時熒光微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基團，用于與蛋白或抗體的共價偶聯(lián)，提高了標記物的穩(wěn)定性。更為重要的是由于微球包埋的稀土離子已經(jīng)過了螯合，無需解離增強步驟，因此從根本上解決了傳統(tǒng)的DELFIA法只能在液相中而不能在固相界面反應的問題，從而解決了將時間分辨熒光應用于免疫層析平臺的技術(shù)瓶頸（詳情請見微測生物時間分辨熒光免疫層析定量檢測平臺），在此基礎(chǔ)上可開發(fā)出靈敏度高于普通膠體金或有色乳膠免疫層析方法1-3個數(shù)量級的定量檢測技術(shù)。同樣時間分辨熒光微球也可以用于微孔板超敏定量檢測技術(shù)平臺（詳情請見微測生物時間分辨熒光微孔板超敏定量檢測技術(shù)平臺），只需洗滌幾次后即可進行熒光測定，操作步驟比DELFIA簡單很多，更容易實現(xiàn)自動化操作。